El protocolo de extracción CTAB

Autor: Sara Rhodes
Fecha De Creación: 14 Febrero 2021
Fecha De Actualización: 28 Junio 2024
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El protocolo de extracción CTAB - Artículos
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Los compuestos químicos bromuro de cetiltrimetilamonio, bromuro de hexadeciltrimetilamonio, bromuro de palmitiltrimetilamonio y bromuro de cetrimonio son todos conocidos por CTAB. El producto químico se utiliza como un manutención de pH en el genoma-secuencial del ADN, en especial de las plantas.


La molienda rompe las paredes celulares de las plantas para la extracción del ADN (Jason Reed / Ryan McVay / Digital Vision / Getty Images)

Fórmula CTAB

Las cantidades de las fórmulas de los diversos productos químicos CTAB varían dependiendo del laboratorio. Sin embargo, todos los ingredientes incluyen 1 M Tris HCl pH 8.0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl y H2O (a veces destilada dos veces). Para el componente de CTAB, algunos laboratorios utilizan bromuro de cetiltrimetilamonio y otros el bromuro de hexadeciltrimetilamonio.

Preparación de tejidos vegetales

La preparación del tejido de la planta puede variar, dependiendo del material. Las paredes y las membranas celulares deben romperse para tener acceso al material nuclear sin ninguna degradación. Normalmente, en la molienda, el material vegetal con nitrógeno líquido permite el acceso al ADN, manteniendo las enzimas celulares perjudiciales y productos químicos inactivos.


Suspensión y centrifugado

El tejido triturado se coloca en la hoja CTAB e insertado en un recipiente con agua corriente. A continuación, se mezcla con cloroformo y centrifugado para separar las proteínas solubles y otros materiales. El ADN es entonces precipitado a partir de la fase acuosa y cuidadosamente lavado para remover las sales contaminantes. El ADN purificado es entonces retirado y almacenado en una lámina TE o agua destilada estéril.