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La tuberculosis es una enfermedad infecciosa causada por la bacteria Mycobacterium tuberculosis y es una enfermedad respiratoria caracterizada por formaciones de tubérculos, necrosis, abscesos, fibrosis y calcificación en los pulmones. También puede infectar los riñones, los ganglios linfáticos, los huesos, las articulaciones y la piel.
El diagnóstico de laboratorio principal de este bacilo implica teñirlo para visualizar las bacterias bajo el microscopio. La muestra de elección es el esputo o el lavado broncoalveolar para identificar una infección respiratoria o una muestra de tejido real.
Fisiología
Mycobacterium tuberculosis es un organismo en forma de bastón (bacilo), espora no móvil y no obligatoria. Esta bacteria mide 0.4x3 micrómetros de longitud y se somete a una fisión binaria (división de la célula reproductora) cada 15 a 24 horas, lo que se considera lento en comparación con otras bacterias. Debido a esto, la micobacteria puede tardar hasta nueve semanas en aparecer en el medio de cultivo.
Este organismo es sensible a la luz ultravioleta y al calor (como la pasteurización), pero resiste los desinfectantes químicos.
Tinción de Gram
Mycobacterium tuberculosis no se puede clasificar realmente como grampositivo o gramnegativo. Esta clasificación se basa en la cantidad de peptidoglicano en la pared celular de una bacteria. Una especie grampositiva tiene una capa gruesa de esta molécula (alrededor del 90%), mientras que una especie gramnegativa tiene una capa delgada (del 5% al 20%). Las tinciones de Gram penetran en la pared celular y se unen a los componentes químicos que contiene. Bajo el microscopio, las bacterias teñidas se volverán moradas o rosadas.
Con mycobacterium tuberculosis, la pared celular está compuesta de peptidoglicano, pero también de lípidos complejos que inhiben la penetración del colorante de gram. La pared celular también resiste la decoloración por ácido o alcohol, por lo que la micobacteria se denomina "resistente a los ácidos". Los lípidos de la pared celular son el ácido micólico, el factor de cuerda y la cera D. Si las bacterias fueran teñidas, las células aparecerían grampositivas o ligeramente pálidas con muy poco color.
Para ver las bacterias, se deben utilizar tintes especiales, como Aumarine o Zhiel-Neelson.
Tinción de aumarina-rodamina
El proceso que utiliza auramina-rodamina utiliza un tinte fluorescente amarillo para visualizar mycobacterium tuberculosis bajo un microscopio de fluorescencia. El permanganato de potasio o la naranja de acridina se pueden utilizar como tinte de contraste. Debajo de la lente, las células bacterianas aparecerán verdes.
El colorante de auramina-rodamina es más sensible que Zhiel-Neelson y más viable económicamente.
Colorear Ziehl-Neelson
La tinción de Ziehl-Neelson fue creada por los científicos Franz Ziehl y Friedrich Neelsen, y utiliza carbol-fucsina calentada, una alta concentración de ácido-alcohol y un tinte de contraste, como malaquita verde o azul de metileno. Bajo un microscopio de fluorescencia, las células bacterianas aparecerán de color rosa brillante.
El tinte Ziehl-Neelson es el estándar de excelencia para la identificación preliminar de mycobacterium tuberculosis y mycobacterium leprae.
Agar
De forma secundaria a la identificación microscópica, Mycobacterium tuberculosis debe cultivarse en un cultivo de agar especial. La gelatina de Lowenstein-Jensen tiene sustancias orgánicas complejas (como huevos y patatas), sales, glicerol y verde malaquita (que inhibe otras bacterias). Se pueden agregar antibióticos para inhibir aún más los microorganismos contaminantes. La muestra se coloca en este agar y las bacterias crecen en tres a nueve semanas.
Se puede usar una solución de cultivo de nutrientes, como albúmina y biotina, para apoyar el crecimiento de incluso la menor cantidad de bacterias objetivo. Esto se conoce como Middlebrook 7H9 (o 7H12).
En ambos medios, las colonias aparecerán como colonias pequeñas, pulidas y de color marrón claro.
Con tecnología avanzada, ahora se puede cultivar mycobacterium tuberculosis mediante un lector automático. Se usa una solución líquida de medio Middlebrook 7H9 y un compuesto indicador fluorescente para monitorear el crecimiento y reportar infección positiva o negativa.